人microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒载体的构建及对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607生物学特性的影响
2015-06-30 文章来源:第四军医大学唐都医院全军骨科中心暨全军骨肿瘤研究所 韩康 点击量:547 我要说
目的:通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系SOSP-9607,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为探索microRNA-194作为骨肉瘤生物治疗的新靶点提供理论和实验依据。
方法:沉默及过表达病毒的构建;稳定感染细胞株的获得,细胞增殖相关生物学特性的改变。
结果:1.PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确,过表达及抑制过表达重组慢病毒的滴度分别为1.5*108TU/ml及4*108TU/ml;2.microRNA-194沉默的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞增殖速度相较于其对照组明显上升;过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞增殖速度显著下降(P<0.01)。3. microRNA-194沉默的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞凋亡率相较于其对照组明显下降。过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。4.与对照组比较,过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少(P
结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制过表达慢病毒表达载体; miR-194的表达水平对SOSP一9607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。microRNA-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点,但该基因对骨肉瘤发生发展的作用及其机制尚待进一步研究。