p14ARF增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞凋亡的研究

第一作者:原向伟

2011-06-08   我要说

原向伟 廖威明 黄秀芳 梁胜根 陈忠羡 范全 秦英 朱孝峰

摘要: 目的 探讨p14ARF对顺铂诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡的影响及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性提供依据。 方法 在不表达p14ARF的U2OS细胞中稳定转染pcDNA3.1﹣p14ARF质粒,构建稳定表达株;采用RT﹣PCR和Western blot法鉴定其表达;台盼蓝拒染法测定生长抑制作用;Hoechst 33258荧光染色检测凋亡;Western blot法检测Caspase﹣3,9和PARP的表达和活化。 结果 mRNA和蛋白水平,U20S和U20S﹣vec细胞未见p14ARF表达,U20S﹣ARF细胞可见p14ARF的高表达;p14ARF单独对U20S细胞的生长无影响,但顺铂(5μM)处理72小时后,U20S﹣ARF细胞的生长抑制率明显高于U20S和U20S﹣vec细胞,相对于U20S和U20S﹣vec细胞,U2OS﹣ARF细胞不仅表现更为明显的凋亡形态学变化,还明显出现了Caspase﹣3,9和PARP的活化裂解。  结论 pl4ARF能够增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞毒作用和凋亡,通过激活Caspase﹣PARP级联活化,提高骨肉瘤U20S细胞对顺铂的敏感性。
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