沉默RANK真核表达载体的构建及有效干扰序列的筛选

第一作者:董彬

2011-06-06 点击量:1071   我要说

董彬  马若凡 陈炎 许杰 丁悦 董文武 李卫平

摘要:  目的 构建沉默小鼠RANK基因的真核表达载体pSuper﹣shRANK,筛选沉默RANK的最佳干扰序列。 方法  针对小鼠RANK基因设计并合成3对干扰序列,将其连接到真核表达载体pSuper上,酶切及测序鉴定正确后命名为pSuper﹣shRANK,后将其用脂质体瞬时转染小鼠骨髓巨噬细胞,用荧光显微镜观察转染情况,用Real﹣time PCR和Western blot分析干扰效率。 结果 酶切分析与测序结果表明重组载体pSuper﹣shRANK构建成功,脂质体共转染后,Real﹣time PCR和Western blot分析结果显示shRANK﹣3干扰效果最好,干扰效率达88.7%,筛选出shRANK﹣3为最佳干扰序列。  结论 成功构建了沉默小鼠RANK基因的真核表达载体pSuper﹣shRANK;筛选出了沉默小鼠RANK的最佳干扰序列,为研究抑制该基因在破骨细胞分化及活化作用机制中奠定了基础。
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