康 夏     康菲    杨波   郭洪峰    权毅    董世武

摘要:目的探讨微小RNA-451（micro RNA-451，miRNA-451）靶向调节钙结合蛋白39（calcium binding protein 39，CAB39）表达，促进MSCs向成骨细胞分化的效应。 方法选择pMIR-report质粒及pRL-TK质粒，通过双荧光素酶基因报告系统，鉴定CAB39是否为miRNA-451的靶基因。将pre-miRNA-451（A组）及anti-miRNA-451（C组）分别转染到C3H10T1/2细胞中，同时设置相应的pre-miRNA阴性对照组（B组）和anti-miRNA阴性对照组（D组）；成骨诱导培养7、14 d，采用实时荧光定量PCR检测成骨标志物Runx2、ALP mRNA相对表达量；诱导培养14 d，采用Western blot检测细胞中CAB39蛋白表达，茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况。 结果经鉴定，CAB39是miRNA-451的靶基因。实时荧光定量PCR检测示，成骨诱导培养7、14 d，A组Runx2、ALP mRNA相对表达量显著高于B组，C组显著低于D组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。成骨诱导培养14 d，Western blot检测示A组CAB39蛋白表达量为0.55 ± 0.05，较B组1.00 ± 0.07明显降低；而C组为1.21 ± 0.05，较D组1.00 ± 0.04明显增高；差异均有统计学意义（P < 0.05）。茜素红染色示A组细胞外钙基质沉积较B组明显增多，而C组细胞外钙基质沉积较D组明显减少。 结论miRNA-451可通过抑制CAB39表达，促进MSCs成骨分化。