贺 斌        陶海鹰         卫爱林         刘世清

摘要:目的探讨羧甲基壳聚糖（carboxymethylated chitosan，CMCS）对雪旺细胞（Schwann cells，SCs）增殖周期及分泌神经营养因子的影响及其作用机制。 方法取3～5日龄SPF级SD大鼠20只，雌雄不限，体重25～30 g，取双侧坐骨神经体外培养SCs，经S-100免疫荧光标记鉴定。取处于对数生长期的第2代SCs，细胞计数检测试剂盒8检测不同浓度CMCS及作用不同时间对SCs增殖的影响。将SCs分为4组，加入CMCS调整终浓度为50（B组）、100（C组）、200 μg/mL（D组），对照组（A组）加入等量PBS，流式细胞技术检测处于S期细胞的百分比（S%）和增殖指数（proliferation index，PI）分析细胞周期；实时定量PCR与Western blot检测SCs合成NGF和睫状神经营养因子（ciliary neurotrophic factor，CNTF）的含量。 结果S-100免疫荧光标记鉴定示细胞阳性率达90%以上。CMCS在10～1 000 μg/ mL浓度范围内对SCs增殖均有促进作用，200、500 μg/mL组促增殖效应最明显（P < 0.01），200 μg/mL与500 μg/mL组间比较差异无统计学意义（P > 0.05）。采用200 μg/mL CMCS培养SCs不同时间，发现作用24 h时其促增殖效果最明显，与对照组（200 μg/mL CMCS作用0 h）比较差异有统计学意义（P < 0.01）。B、C、D组S%及PI均显著高于A组，差异有统计学意义（P < 0.05）；C、D组显著高于B组（P < 0.05），C、D组间差异无统计学意义（P > 0.05）。实时定量PCR和Western blot检测均显示，B、C、D组NGF与CNTF mRNA和蛋白表达均显著高于A组（P < 0.05）；其中D组作用最明显。 结论CMCS可以促进SCs增殖及细胞周期进程以及分泌神经营养因子。