孙明林      安博       孙铭泽        朱雷       张春秋  

【摘要】目的采用静电纺丝聚已内酯（polycaprolactone，PCL）支架与软骨细胞复合培养，比较静态和灌流生物反应器培养条件下对细胞增殖及基质分泌的影响。方法构建PCL支架，自制灌流生物反应器，分离兔软骨细胞，培养后接种于PCL支架，分为灌流培养组和静态培养组。在培养第3、7、14天对支架一细胞复合体行扫描电镜观察，DNA、糖胺聚糖和总胶原定量检测；在培养第14天分析软骨特异性基因表达并观察软骨基质分泌情况。结果电镜观察PCL支架纤维直径（1．67±0．76）μm，孔径（17．65±7．11）μm，可见支架中软骨细胞黏附生长良好，灌流培养条件下细胞增殖快，且较好地保持了软骨细胞特征形态。在培养第7天，灌流培养组DNA定量高于静态培养组；在培养第3、7和14天，灌流培养组糖胺聚糖定量均高于静态培养组，灌流培养组糖胺聚糖／DNA比值均高于静态培养组。在培养第14天，灌流培养组Ⅱ型胶原、蛋白聚糖基因表达增加；软骨分化指数高于静态培养组。在培养第14天，组织学染色可见灌流培养促进细胞的增殖和渗透生长，提高了软骨基质的分泌，并见软骨陷窝样结构。结论在灌流生物反应器培养条件下，静电纺丝PCL支架与软骨细胞复合培养可促进软骨细胞的增殖和基质的分泌，提高了组织工程软骨的质量。