顾羊林      王予彬     施克勤     杨玉生     陈鹏     朱文辉    朱国兴

摘要:  目的探讨与聚乳酸聚乙酸共聚物[poly（lactide-co-glycolide），PLGA]支架复合后的成肌细胞体外经软骨来源形成蛋白2（cartilage-derived morphogenetic protein 2，CDMP-2）联合TGF-β1诱导后，能否在裸鼠体内异位构建组织工程软骨。 方法取1岁龄雄性比格犬股直肌肌肉分离培养成肌细胞，取第4代成肌细胞接种于PLGA支架，加入含CDMP-2与TGF-β1的软骨诱导液体外培养2周。实验分为4组：A组为经软骨诱导的成肌细胞-PLGA复合物组，B组为未经软骨诱导的成肌细胞-PLGA复合物组，C组为经软骨诱导的单纯PLGA支架组，D组为单纯PLGA支架组。于24只裸鼠背部皮下两侧制备4个皮下腔隙，分别植入4组材料。术后8、12周处死裸鼠，取材行大体观察、HE及甲苯胺蓝染色、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察，RT-PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖（Aggrecan）、Sox9 mRNA表达，阿利新蓝染色检测糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAG）含量，生物力学试验检测标本压缩弹性模量。 结果A组标本术后8周呈类软骨样，乳白色，表面光洁，有弹性；12周时外观和弹性与正常软骨相似。B组术后8周仅残余少许组织，12周已完全降解；C、D组标本术后8周均降解消失。HE染色示A组8、12周时有成熟软骨陷窝形成；B组8周时组织内未见软骨陷窝形成。甲苯胺蓝染色示A组8、12周时组织内新生软骨细胞形成，细胞椭圆，排列整齐，细胞陷窝形成，细胞质和细胞外基质均蓝染阳性；B组8周时组织内未见蓝染的细胞外基质。Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示A组8、12周时均呈阳性表达；B组8周时呈阴性表达。RT-PCR检测示术后8、12周A组均可见Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Aggrecan和Sox9 mRNA表达，B组均呈阴性。术后12周A组压缩弹性模量为（90.79 ± 1.78） MPa，GAG含量为（10.20 ± 1.07）μg/mL与正常半月板相比，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论体外CDMP-2联合TGF-β1软骨诱导的比格犬成肌细胞复合PLGA支架后具备在裸鼠体内异位构建组织工程软骨的能力。