许海委   徐宝山   杨强   李秀兰  张杨  张春秋  伍耀宏  崔丽

目的利用软骨细胞与脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）共培养，观察ADSCs是否能向软骨细胞定向分化。 方法4月龄健康新西兰大白兔8只，雌雄不限，体重2.2～2.7 kg，分离、培养兔软骨细胞和ADSCs，取第2代细胞用于实验。将实验分为两组，实验组各取将1 mL细胞密度为2 × 104个/mL的软骨细胞和ADSCs分别接种至Transwell小室6孔板上、下层共同培养，对照组单独培养ADSCs。倒置相差显微镜观察两组ADSCs形态变化；培养14 d后行甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色，实时荧光定量PCR检测两组ADSCs Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9 mRNA表达。 结果倒置相差显微镜观察示，随培养时间延长，实验组ADSCs逐渐变为软骨样细胞形态，呈圆形；对照组ADSCs仍以梭形为主，呈束状或漩涡状生长。培养14 d，实验组甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均为阳性；对照组均为阴性；实时荧光定量PCR检测示，实验组Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9 mRNA相对表达量分别为1.43 ± 0.07、2.13 ± 0.08、1.08 ± 0.08，显著高于对照组（0.04 ± 0.03、0.13 ± 0.04、0.10 ± 0.02），差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论通过与软骨细胞共同培养，ADSCs可定向分化为软骨细胞。