罗文     范建楠     叶川

【摘 要】 目的 构建新型自组装多肽纳米凝胶支架RGDmx，探讨支架的细胞相容性及其对前软骨干细胞（precartilaginous stem cells，PSCs）增殖和向软骨细胞方向分化的影响。 方法 取新生SD 大鼠四肢长骨干骺端组织分离培养PSCs，采用免疫磁珠分选系统分选纯化原代细胞，并进行鉴定。取KLD-12、KLD-12-PRG 多肽冻干粉，以体积比1 ∶ 1 复合构建RGDmx。将纯化后的第3 代PSCs 接种至KLD-12（对照组）和RGDmx（实验组）培养，1、3、7、14 d用细胞计数（cell counting kit，CCK）-8 法检测支架细胞增殖- 毒性；制备不同混合比（0、20%、40%、60%、80%、100%）RGDmx，观察其对PSCs 增殖的影响；采用无血清软骨形成培养液（complete chondrogenic medium，CCM）诱导两组支架内PSCs 向软骨细胞方向分化，培养14 d 时行甲苯胺蓝染色法鉴定，并用RT-PCR 法检测两组软骨分化特异性基因Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达情况。 结果 成功分离纯化获得成纤维细胞生长因子受体3 表达阳性细胞，免疫组织化学染色及免疫荧光染色鉴定为PSCs。CCK-8 检测结果显示，复合培养后实验组细胞吸光度（A）值随培养时间延长逐步提高，7 d达峰值；其中7、14 d 时细胞A 值高于对照组（P < 0.05）；复合培养7 d 时，混合比为40% 组细胞A 值较其他混合比组高，差异有统计学意义（P < 0.05）.CCM 诱导培养14 d 时，两组支架内细胞甲苯胺蓝染色均呈阳性；RT-PCR 检测示实验组细胞Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA 表达水平均高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 自组装多肽纳米凝胶支架RGDmx 具有良好的细胞相容性，可有效促进PSCs 增殖及向软骨细胞方向分化，是组织工程较理想的细胞载体系统。