曾辉　孙梦熊　王卓莹　廖宇昕　付东　吴非　华莹奇　蔡郑东

目的　探讨血卟啉单甲醚介导的光动力疗法(HMME-PDT)对骨肉瘤LM-8细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法　将LM-8细胞与不同浓度的HMME (10、20、30μg/ml)共同孵育，4h后，给予不同能量密度的激光(3、6、9J/cm2)照射，同时设空白组(无光敏剂也无光照)、暗毒组(无光照但加入光敏剂)、激光组(不加光敏剂但给予光照)。MTT法检测细胞存活率，采用AnnexinV-FITC/PI染色的流式细胞分析法检测LM-8细胞凋亡和周期情况，Hoechst33342染色法观察细胞凋亡，实时定量PCR (QRT-PCR)分别检测Caspase-3、Bcl-x、p53、RelA mRNA表达水平，免疫印迹(Western blotting)分别检测Caspase-3、Bcl-x、p53、RelA蛋白的相对表达量。结果　HMME-PDT能显著抑制骨肉瘤LM-8细胞增殖，且杀伤效应随着HMME浓度及能量密度的增高而增强。然而单独光照或单独给予光敏剂孵育，对骨肉瘤LM-8细胞均无杀伤作用。流式细胞术检测发现凋亡率显著增高，10μg/ml HMME组为(12.3±2.82)%，20μg/ml HMME组为(20.67±5.58)%，30μg/ml HMME组为(42.53±4.64)%，凋亡率与空白组比较，结果分别为(t＝-2.889，P＝0.045)、(t＝-4.418，P＝0.014)、(t＝-5.780，P＝0.04)。周期结果显示：G0/G1期细胞明显增高、Ｓ期细胞明显降低，30μg/ml组G0/G1期为(50.09±3.15)%、Ｓ期为(28.17±1.10)%，与空白对照组比较，结果分别为(t＝-6.081，P＝0.004)、(t＝5.852，P＝0.004)。HMME-PDT处理LM-8细胞后经Hoechst33342染色后呈现出典型的凋亡改变(如：核固缩、细胞变圆等)。QRT-PCR和Western bloting结果显示：HMME-PDT可显著上调Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量且表达量随着HMME浓度增高而增高。而HMME-PDT可明显下调Bcl-x、p53、RelA mRNA和蛋白相对表达量且表达量随着HMME浓度增高而降低。结论　在体外HMME-PDT对骨肉瘤LM-8细胞有显著的杀伤效应，其杀伤效应与Caspase-3、Bcl-x、p53和RelA密切相关。