李晋惠　吕 智　马 卓　冯 毅　王 军　兰彦平　张桦栋

目的　研究脂质体介导的TK/GCV系统对人骨肉瘤细胞的杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法　构建重组质粒pIRES-EGFP-tk，制备和转化感受态大肠杆菌BL21以及鉴定测序，提取、纯化重组质粒DNA，培养和转染人骨肉瘤细胞株U-2 OS，流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态，用转染后的培养液的上清加入TK (-) U-2 OS中观察旁观者效应。结果　成功地构建出包含有TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk，通过PCR等方法鉴定质粒大小和位点均符合实验设计。荧光显微镜下观察U-2 OS (TK+)呈现绿色荧光。U-2 OS TK/GCV培养上清液可明显诱导细胞凋亡。但将上清液用0.2μm的滤膜滤过后，诱导凋亡作用消失。结论　成功构建重组质粒pIRES-EGFP-tk，体外实验表明人骨肉瘤细胞系U-2 OS对脂质体介导的TK/GCV系统敏感，并且有明显的旁观者效应，可望成为骨肉瘤基因治疗的新途径。