陀泳华   郭小磊    张鑫鑫    王钊    周健    张永涛    夏立恒   文军    金丹

目的 组织工程骨的神经化能有效促进支架材料内血管生成，修复骨缺损。研究降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）对人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）增殖与迁移的作用，进一步揭示组织工程骨的神经化促血管生成机制。 方法 体外分离获取HUVECs，并通过血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）与CD31 抗原鉴定，取第1 代细胞用于实验。实验分为6 组，分别以0（A 组）、1 × 10—12（B 组）、1 × 10—11（C 组）、1 × 10—10（D 组）、1 × 10—9（E 组）、1 × 10—8 mol/L（F 组）浓度CGRP 干预HUVECs。采用细胞免疫荧光观察HUVECs 的CGRP1 受体（CGRP1 receptor，CGRP1R）表达情况，AlarmarBlue 法动态检测各组HUVECs 增殖率，Transwell 小室检测各组HUVECs 的迁移能力，ELISA 法检测HUVECs 分泌VEGF 的水平，Westernblot 法检测其局部黏着斑激酶（focal adhesion kinase，FAK）的表达。 结果 分离的细胞通过形态学及vWF、CD31 免疫荧光鉴定为HUVECs，并可见CGRP1R 在细胞质和细胞膜表达。CGRP 呈时间- 浓度依赖性刺激HUVECs 增殖；B ～ F组各时间点细胞增殖能力均高于A 组（P < 0.05），F 组各时间点细胞增殖能力最高。B ～ F 组迁移细胞数均显著高于A组（P < 0.05），最大增幅达3 倍以上。B ～ F 组VEGF 分泌量均显著高于A 组（P < 0.05）；C、D 组促进细胞分泌VEGF 的能力最强。Western blot 检测示，与A组相比，B～F组CGRP刺激HUVECs 3、7、10 d 后，FAK表达明显增加（P < 0.05）。 结论 CGRP 对HUVECs 的增殖和迁移有直接促进作用，可能作用机制为CGRP 能促进VEGF 分泌和增加FAK 的表达。