冯瑞强   江建明   李俊青   付兆宗  林振   袁亮  杨德鸿

目的 探讨信号选择性甲状旁腺素（parathyroid hormone，PTH）模拟肽在促进小鼠成骨细胞成骨过程中对Wnt 信号传导通路相关因子的影响，研究其成骨的作用机制。 方法 取2 ～ 3 日龄C57BL 乳鼠颅盖分离培养成骨细胞，倒置相差显微镜观察形态变化，ALP 染色和茜素红染色对成骨细胞进行鉴定。取贴壁生长的第1 代细胞，随机分为4 组：PTH（1-34）组、G1R19（1-34）组和G1R19（1-28）组分别加入10 nmol/L PTH（1-34）、10 nmol/L G1R19（1-34）、100 nmol/L G1R19（1-28），空白对照组加入等体积的0.1% 三氟乙酸（trifluoroacetic acid，TFA）。实时定量PCR 法检测Wnt 信号通路相关基因β-catenin、骨钙素（osteocalcin，OC）、Wnt2、Wnt5b、Wnt7b 基因的表达。 结果 倒置相差显微镜观察示，培养7 d 可见细胞排列紧密，为三角形或多边形，呈铺路石样；细胞培养14 d ALP 染色可见细胞质中出现蓝染颗粒，成骨诱导培养28 d 茜素红染色可见细胞外基质中红色矿化结节形成。实时定量PCR 检测发现，各处理组OC、Wnt5b mRNA 相对表达量均高于空白对照组，Wnt2 mRNA 相对表达量均低于空白对照组；PTH（1-34）组、G1R19（1-34）组Wnt7b mRNA 相对表达量高于空白对照组，G1R1（9 1-34）组高于PTH（1-34）组和G1R1（9 1-28）组；PTH（1-34）组β-cateninmRNA 相对表达量显著高于空白对照组；以上差异均有统计学意义（P < 0.05）。其余各因子mRNA 表达各组间比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。 结论 在所检测的Wnt 相关因子中，PTH（1-34）和G1R19（1-34）对经典Wnt 信号因子作用明显，G1R19（1-28）对非经典Wnt 信号因子作用明显。