王正辉  吴宝俊  Kamal Mustafa

【摘 要】 目的 种子细胞来源是软骨组织工程的研究热点。探讨以RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术干扰多聚蛋白聚糖酶（Aggrecanase）后的软骨细胞作为组织工程种子细胞的可行性。 方法 取成年SD大鼠肋软骨采用消化法分离培养软骨细胞。取第1代细胞分为空白阴性对照组（对照组）及慢病毒转染组（实验组）两组。将两组细胞分别与壳聚糖/明胶材料进行体外复合培养制备组织工程软骨，于培养后不同时间点通过HE、Masson染色，扫描电镜观察以及RT-PCR方法检测两组软骨中蛋白聚糖（Aggrecan）以及Aggrecanase-1、2的变化情况。 结果 组织学观察示培养2周时，对照组与实验组相比细胞数量及细胞外基质未见明显差别；随着培养时间延长，实验组较对照组细胞外基质分泌增多，细胞数目更多。RT-PCR 结果显示培养4、8周，实验组细胞Aggrecan mRNA表达量明显高于对照组，Aggrecanase-1和Aggrecanase-2 mRNA表达量明显低于对照组，比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。扫描电镜显示实验组细胞数量明显多于对照组，且细胞间连接紧密。 结论 采用RNAi技术干扰Aggrecanase后的软骨细胞可以作为组织工程软骨种子细胞，其在材料上分泌Aggrecan的含量明显高于正常软骨细胞，其生物学活性需进一步研究。