目的 研究表皮细胞去分化过程中hTERT的表达差异,为进一步揭示表皮细胞去分化的分子机制提供实验参考。
    方法 bFGF诱导表皮细胞去分化形成表皮前体干细胞,免疫细胞化学染色法检测bFGF诱导培养后表皮细胞表型的改变,同时采用流式细胞检测技术、免疫荧光染色技术及TRAP-银染法检测bFGF诱导培养后表皮细胞中hTERT的表达差异。同期分离培养的人在体表皮干细胞作为本次实验的阳性对照。
    结果 免疫细胞化学染色表明bFGF诱导培养后,实验组细胞中β1-integrin、CK19、CK14的表达增强,而CK10的表达明显降低。流式细胞技术检测显示bFGF诱导后实验组、对照组及阳性对照组中hTERT表达阳性的细胞亚群分别占被检测细胞总数的98.41%、0.77%及99.76%。TRAP-银染法检测结果显示,实验组细胞中端粒酶的表达活性明显上调,虽然hTERT的活性在实验组和阳性对照组中没有显著性的差异,但间接免疫荧光染色结果显示端粒酶逆转录酶在实验组去分化来源表皮干细胞和在体表皮干细胞中存在着亚细胞位点分布差异。
    结论 bFGF 诱导表皮细胞去分化并重新获得表皮干细胞的表型,这一过程不但能够引起hTERT的表达及活性发生变化,而且从亚细胞水平上诱导其发生位点迁移,为进一步深入阐述表皮细胞去分化的分子机制提供实验参考。