徐学振  于占革  杨威  魏伟  李念龙  张东

【摘要】 目的  比较不同代次兔髓核细胞冻存后的生物学特性，找出适合作为种子细胞冻存的兔髓核细胞代次。方法  取3～4月龄新西兰大白兔10只，麻醉后在严格无菌条件下分离胸腰椎间盘（T1/2～L7/S1）髓核细胞，体外传代培养，分别取一、二、三、四、五代细胞冻存2～3个月后复苏，取一代未冻存细胞作为对照组（A组，n=10）；一、二、三、四、五代冻存后复苏的细胞作为实验组（分别为B、C、D、E、F组，各组n=10），在相同条件下培养2周，培养第2天时采用台盼蓝染色测定细胞成活率；培养第2d、5d、10d、14d时采用MTT法检测细胞生长活性，采用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖（PG）含量；培养第14d时采用阿利新兰染色法测定糖胺聚糖（GAG）合成总量，用RT-PCR法检测各组细胞Ⅱ型胶原基因的表达情况。检测细胞浓度均为1×105个/ml。采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果  培养第2d时B、C组细胞成活率接近A组（P>0.05）；D、E、F三组细胞成活率明显低于A、B、C组（P<0.05）。不同时间点各组细胞均有不同程度的增殖，A、B、C、D四组生长趋势较接近，A、B、C三组相同时间点生长活性比较差异无统计学意义（P>0.05），D组与同一时间点A组比较有显著性差异（P<0.05），E组第10d和第14d以及F组各时间点间比较差异无显著性（P>0.05）；A、B、C三组各时间点的PG含量及GAG含量高于相应时间点D、E、F组（P<0.05）；A、B、C三组的Ⅱ型胶原基因表达量高于D、E组（P<0.05），明显高于F组（P<0.01）。结论  不同代次兔髓核细胞冻存后生物学特性不同，第一、二代细胞冻存后能较好保持髓核细胞特性，可作为种子细胞进行低温保存。