重组蛋白sCAR⁃TMTP1增强腺病毒对骨肉瘤细胞基因转染效率的研究

第一作者:罗丹枫

2016-12-29 点击量:598   我要说

罗丹枫 龚静吉 程腾 魏睿 魏军成 祝文涛

目的 提高腺病毒(adenovirus,ADV)在缺乏柯萨奇腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)的骨肉瘤细胞中的转染效率。

方法 通过昆虫(Bac-to-Bac)杆状病毒表达系统表达含有CAR胞外段(sCAR)及TMTP1肽的重组蛋白(sCAR-TMTP1),并对其纯化、鉴定。流式细胞仪分别检测骨肉瘤细胞及人胚肾细胞293(HEK293)的CAR表达水平,ADV对其的感染效率及FITC-TMTP1的结合能力。重组蛋白 sCAR-TMTP1与ADV共同孵育形成复合物,流式细胞仪研究其在缺乏CAR的骨肉瘤细胞(MG-63)中的转染效率。

结果 表达及纯化的sCAR-TMTP1蛋白在相对分子质量约31000处可见特异蛋白条带,感染的sf9细胞裂解上清可与兔抗小鼠sCAR单克隆抗体发生特异性反应。MG-63可与FITC-TMTP1特异结合,其CAR表达水平低,ADV转染效率低。经sCAR-TMTP1修饰后的ADV/GFP对MG-63细胞的感染效率显著高于未经修饰的含报告基因GFP的ADV(ADV/GFP)。

结论 重组蛋白sCAR-TM-TP1可显著提升ADV对缺乏CAR的骨肉瘤细胞的转染效率。


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