王超锋  阮狄克  张超  辛洪奎  徐成

摘要：目的  探讨深低温保存温度及保存时间对椎间盘生物活性的影响。方法  取1岁龄Beagle犬新鲜椎间盘72个，分为对照组（A组，n=8）、-80℃保存组（B组，n=32）和-196℃保存组（C组，n=32）。B和C组在冷冻保存液中分别保存于-80℃低温冰箱及-196℃液氮中，在保存2w、2m、6m及12m时每组每个时间点取8个椎间盘，通过溴化吡啶/二乙酸荧光素（EB/FDA）荧光染色法检测椎间盘组织中不同部位的细胞存活率，以二甲基亚甲蓝（DMMB）染色法检测髓核组织蛋白多糖（PG）含量，以羟脯氨酸检测法测定纤维环组织中的总胶原含量；对照组取标本后直接进行以上检测。结果  B和C组椎间盘在保存至2w时各部位细胞存活率较A组明显下降，2m～12m保存期间，B、C两组椎间盘各部位的细胞存活率均维持在相对恒定的水平，但均较2w时下降；B组及C组外层纤维环细胞存活率在保存2w和2m时无明显差别（P>0.05），在保存6m及12m时C组明显高于B组（P<0.05）；C组内层纤维环及髓核组织细胞存活率在各检测时间点均明显高B组（P<0.05）。B、C两组在各检测时间点PG含量均较A组明显降低，在保存2m～12m期间，C组PG含量均高于B组（P<0.05）。B、C两组总胶原蛋白含量在保存期间随时间逐渐降低，但两组间未见明显差异（P>0.05）。结论  利用-196℃保存椎间盘组织，无论在细胞总的存活率及PG含量上均优于-80℃保存；-196℃保存12个月时椎间盘细胞存活率及PG含量均维持在相对稳定的水平，能满足同种异体椎间盘移植的要求。