刘汝银  岳宗进  彭晓艳  王新立  冯仲锴

目的：探讨Paxillin对骨髓间充质干细胞（BMSCs）向类髓核细胞分化的影响。

方法：取3周龄健康SD大鼠骨髓，采用全骨髓贴壁法培养BMSCs，传至第3代，用流式细胞仪对其表面标志分子进行鉴定。利用pcDNA3.1（-）/Myc-His B质粒构建真核表达载体pcDNA3.1-Paxillin。取第3代BMSCs分为3组：实验组，转染pcDNA3.1-Paxillin；阴性对照组，转染pcDNA3.1（-）/Myc-His B；空白对照组，不转染质粒。分别培养36h后，实验组和阴性对照经G418筛选，取3组BMSCs采用实时荧光定量PCR方法（qRT-PCR）检测各组Paxillin、蛋白多糖（Aggrecan）、Ⅱ型胶原α1（collagen type Ⅱα1，COL2α1）、性别决定区Y框蛋白9（sex determining region Y box protein 9，SOX9）、角蛋白19（keratin19，KRT19）、配对盒1（paired box 1，PAX1）和叉头蛋白（forkheadbox F1，FOXF1）的mRNA表达量；免疫印迹法（Western blot）检测Paxillin、KRT19、PAX1和FOXF1蛋白表达水平。

结果：BMSCs原代培养至第3代的细胞形态大体一致，呈长梭形，细胞连接紧密且均匀分布，CD44、CD90呈现高表达（95.6%和96.8%），CD45、CD11则呈现低表达（1.82%和2.16%）。实验组中Paxillin的mRNA和蛋白表达量较阴性对照组和空白对照组升高，差异具有显著性（P＜0.05）；经G418筛选后的BMSCs和髓核细胞形态相似。实验组中COL2α1、SOX9、Aggrecan、KRT19、PAX1、FOXF1的mRNA表达量较阴性对照组和空白对照组显著性升高（P<0.05）；实验组KRT19、PAX1和FOXF1的蛋白表达量显著性高于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）。

结论：Paxillin可以促进BMSCs向类髓核细胞分化，为椎间盘退变性疾病的细胞移植治疗提供基础。