Paxillin对骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化的影响

第一作者:刘汝银

2016-07-28 点击量:149   我要说

刘汝银  岳宗进  彭晓艳  王新立  冯仲锴

目的:探讨Paxillin对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向类髓核细胞分化的影响。

方法:取3周龄健康SD大鼠骨髓,采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,传至第3代,用流式细胞仪对其表面标志分子进行鉴定。利用pcDNA3.1(-)/Myc-His B质粒构建真核表达载体pcDNA3.1-Paxillin。取第3代BMSCs分为3组:实验组,转染pcDNA3.1-Paxillin;阴性对照组,转染pcDNA3.1(-)/Myc-His B;空白对照组,不转染质粒。分别培养36h后,实验组和阴性对照经G418筛选,取3组BMSCs采用实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测各组Paxillin、蛋白多糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原α1(collagen type Ⅱα1,COL2α1)、性别决定区Y框蛋白9(sex determining region Y box protein 9,SOX9)、角蛋白19(keratin19,KRT19)、配对盒1(paired box 1,PAX1)和叉头蛋白(forkheadbox F1,FOXF1)的mRNA表达量;免疫印迹法(Western blot)检测Paxillin、KRT19、PAX1和FOXF1蛋白表达水平。

结果:BMSCs原代培养至第3代的细胞形态大体一致,呈长梭形,细胞连接紧密且均匀分布,CD44、CD90呈现高表达(95.6%和96.8%),CD45、CD11则呈现低表达(1.82%和2.16%)。实验组中Paxillin的mRNA和蛋白表达量较阴性对照组和空白对照组升高,差异具有显著性(P<0.05);经G418筛选后的BMSCs和髓核细胞形态相似。实验组中COL2α1、SOX9、Aggrecan、KRT19、PAX1、FOXF1的mRNA表达量较阴性对照组和空白对照组显著性升高(P<0.05);实验组KRT19、PAX1和FOXF1的蛋白表达量显著性高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。

结论:Paxillin可以促进BMSCs向类髓核细胞分化,为椎间盘退变性疾病的细胞移植治疗提供基础。


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