曾文容  陈志达  刘庆军  林斌  吴欣宇  吴进

目的 检测过表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)联合特异性沉默Etheràgo-go 1(Eag 1)基因对骨肉瘤的影响。

方法 分别构建名为Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag、CRAd5.TRAIL和CRAd5.TRAIL/si Eag1的腺病毒载体并检测其抗骨肉瘤的作用。

结果 Ad5.e GFP对MG-63细胞中的Eag 1和TRAIL表达无明显影响,CRAd5.si Eag仅可抑制Eag 1的表达,CRAd5.TRAIL仅可过表达TRAIL,而CRAd5.TRAIL/si Eag1既能沉默Eag 1又能过表达TRAIL。细胞增殖实验结果显示:CRAd5.TRAIL/si Eag1比Ad5.e GFP、CRAd5.TRAIL或CRAd5.si Eag1能更有效地抑制骨肉瘤细胞增殖。同时,对人成骨细胞h FOB 1.19无明显细胞毒性。CRAd5.TRAIL/si Eag1组Caspase-3/7活性为(39693.33±1922.96)RLU,Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组Caspase-3/7活性分别为:(2832.83±375.99)、(3242.50±329.97)和(15583.17±698.54)RLU。统计学分析显示CRAd5.TRAIL/si Eag1组Caspase-3/7活性明显高于其它三组(P0.001)。此外,CRAd5.TRAIL/si Eag1还可有效地诱导MG-63细胞中PARP裂解物表达。局部注射第8天,CRAd5.TRAIL/si Eag1组裸鼠肿瘤的体积为(231.19±25.96)mm3,Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组裸鼠肿瘤体积分别为:(504.68±102.32)、(365.85±47.60)和(355.48±35.34)mm3,CRAd5.TRAIL组裸鼠肿瘤体积与其它三组相比差异均有统计学意义(P0.05)。第10、12和14天,CRAd5.TRAIL/si Eag1组裸鼠肿瘤的体积分别为:(367.82±39.52)、(470.18±60.11)和(631.52±61.22)mm3,Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组裸鼠肿瘤体积分别为:(826.57±130.60)、(1284.69±243.50)和(1762.06±180.36)mm3,(552.12±64.39)、(721.82±108.20)和(949.20±124.70)mm3,(524.03±43.47)、(653.54±56.22)、(896.44±93.64)mm3。与其它三组相比,CRAd5.TRAIL/si Eag1可更有效地抑制裸鼠骨肉瘤生长。TUNEL实验结果显示:CRAd5.TRAIL/si Eag1的凋亡指数为(27.33±2.07)%,而Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组的凋亡指数分别为(2.68±0.64)%,(8.49±1.06)%和(15.99±1.94)%,CRAd5.TRAIL/si Eag1组与其它三组相比可有效地促进骨肉瘤凋亡(P0.001)。

结论 过表达TRAIL联合特异性沉默Eag 1基因可产生协同抗骨肉瘤作用,因此CRAd5.TRAIL/si Eag1腺病毒载体可作为一个有效的骨肉瘤基因治疗工具。