牛朋彦  熊伟  李锋  张帆  姚广清  张勇

摘要：目的  观察软骨终板营养通路通透性对外培养大鼠髓核细胞生物学特性的影响。方法  4周龄雄性SD大鼠20只，处死后立即手术切取腰段椎间盘（包括邻近的软 骨终板），每只6个，随机分为A、B、C 3组，其中A组为正常对照组，B组用骨蜡封闭上软骨终板，C组用骨蜡封闭上、下软骨终板，3组椎间盘在体外进行整体器官培养。于培养前和培养7d、14d 时，分别用Mitotracker Green荧光探针和RT-PCR方法评估椎间盘髓核细胞的活力和髓核Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA的表达；于培养前和培养14d时用免疫组化方法观察髓核 蛋白多糖、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶3（MMP-3）的表达。结果  取材后培养前髓核细胞的荧光强度最高；在体外培养7d，3组髓核细胞的荧光强度较培养 前变化均不明显，3组之间无显著性差异（P>0.05）；培养14d时A、B、C组荧光强度较培养前分别降低约19%、22%和30%，与培养前比 较差异均有显著性（P<0.05），其中C组与A、B两组比较有显著性差异（P<0.05），A、B两组比较差异无显著性 （P>0.05）。免疫组织化学观察显示在培养14d时3组髓核蛋白多糖和Ⅱ型胶原的染色强度与培养前比较均有所降低，MMP-3阳性染色增加，蛋 白多糖、Ⅱ型胶原和MMP-3染色强度的变化以C组最为明显。3组髓核细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA的表达在培养7d和14d时均较培养前显著降低 （P<0.05），其中7d时3组之间无显著性差异（P>0.05），14d时A、B两组间无显著性差异（P>0.05），C组与A、 B组比较有显著性差异（P<0.05）。结论  降低体外培养大鼠椎间盘上下软骨终板的通透性，可在短期内影响髓核细胞的生物学特性，加速椎间盘的退变。