孙宁  黄益洲  张忆  皮晋魁   JaznieLaw   邓力  吴诚光

目的 探讨人胎盘蜕膜基层来源MSCs（placental decidua basalis derived MSCs，PDB-MSCs）参与裸鼠全层皮肤缺损修复的效果。

方法 取自愿捐赠人胎盘组织，采用酶消化法结合密度梯度离心法分离培养PDB-MSCs并传代，取第4代细胞进行实验。倒置相差显微镜观察细胞形态，行成骨与成脂诱导鉴定，检测细胞表面特异性抗原表达以鉴定细胞。取42只4～5周龄雌性BALB/c裸鼠，随机分为两组（n=21）；分别将200 μL浓度为5×106个/mL的第4代PDB-MSCs及等体积PBS经尾静脉注射入实验组及对照组裸鼠体内；注射后3 d实验动物于背部制备大小为1.5 cm×1.5 cm全层皮肤缺损模型。术后1、2、4、7、14、18、21、25、30 d大体观察创面愈合情况，待创面开始脱痂后测量创面愈合率。术后1、7、14、21、30 d取材行HE染色，观察创面修复情况；7、14、30 d实验组采用免疫荧光染色法行细胞定位分析。

结果 经鉴定胎盘蜕膜组织所分离的细胞为MSCs，具有多向分化能力和MSCs免疫组织表型。术后两组裸鼠存活至实验完成。大体观察示，实验组创面愈合较对照组快，其中实验组于术后12～14 d、对照组于14～17 d开始脱痂。实验组术后14、18、21 d创面愈合率均显著高于对照组（t=4.001，P=0.016；t=3.380，P=0.028；t=3.888，P=0.018）；25、30 d两组比较差异无统计学意义（t=1.565，P=0.193；t=1.000，P=0.423）。组织学观察示，与对照组比较，实验组皮肤创面组织炎性反应低，并且随时间延长皮肤各层组织及腺体等再生良好。免疫荧光染色示，术后各时间点实验组皮肤创面区域均可见人线粒体抗原染色阳性，提示存在人源细胞。

结论 通过酶消化法结合密度梯度离心法 可 稳定获得PDB-MSCs，预先注射入裸鼠体内后，在皮肤损伤条件下细胞可向皮肤损伤部位迁移，并促进创面修复。