袁昊  曾晖  肖德明  于斐  林健静

目的 探讨Res对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠软骨细胞核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活化及炎症因子基因表达的调节及其相关机制。

方法 体外分离培养小鼠膝关节软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫荧光检测进行软骨细胞鉴定。根据加入不同培养物分为3组:LPS组(1μg/ml LPS);Res组(100μmol/L Res+1μg/ml LPS);空白对照组。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组软骨细胞中NF-κB抑制蛋白α(inhibitor of NF-κB-α,I-κBα)的表达量,细胞免疫荧光染色观察NF-κB核转位情况,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)测IL-1β、TNF-αm RNA表达量。

结果 荧光显微镜下可见软骨细胞核呈蓝色荧光,胞质呈红色荧光。ELISA检测:LPS组的I-κBα表达量低于空白对照组(P<0.05),Res组明显高于LPS组(P<0.01)。细胞免疫荧光染色检测:与空白对照组相比,LPS组中NF-κB发生明显的核转位,而Res组中NF-κB的核转位受到抑制。RT-PCR检测:LPS组中IL-1β和TNF-αm RNA的表达量与空白对照组相比明显上调,而Res组中IL-1β和TNF-αm RNA的表达量与LPS组相比明显下调,均有统计学差异(P<0.05)。

结论 Res可通过NF-κB信号通路影响软骨细胞IL-1β、TNF-αm RNA的表达,进而降低软骨细胞炎症反应,延缓关节软骨细胞退变。