张凯彬  石晶  李杨  蒋逸秋  丁朋  杨晓霏  桂鉴超

目的 探讨大鼠软骨非全层损伤模型的制备及术后细胞变化及细胞活化与整合素β1表达的关系。

方法 10周龄SD雄性大鼠45只，体质量300～400g，随机分为手术组、假手术组和对照组，每组15只。手术组采用划痕法制造软骨非全层损伤模型；假手术组打开膝关节囊后直接缝合；对照组不行手术。术后1、7、14d各组分别处死5只大鼠，取材行大体观察；并行HE、番红O组织学染色，评估并比较各组HE染色改良组织学评分及番红O染色灰度值；行BrdU、CD105免疫荧光染色和CD105/整合素β1双标记染色，采用标准双盲法计数并比较各组各时间点CD105阳性细胞数。

结果 大体观察示手术组划痕周围软骨欠光滑，非透明，有软骨软化、纤维化改变，且随造模时间延长逐渐加重；假手术组和对照组软骨呈白色透明状，无软化、纤维化改变。HE染色示手术组在划痕周围细胞数增多，大小不等，排列分布不均；假手术组和对照组细胞大小均一，染色均匀，排列有序。手术组术后各时间点HE染色改良组织学评分均显著高于假手术组及对照组（P<0.05），各组组内各时间点间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。番红O染色示手术组各时间点染色欠均匀，划痕周围区域着色较浅；假手术组和对照组各时间点染色均匀，无失染。术后各时间点各组间比较以及各组内各时间点间比较番红O染色灰度值，差异均无统计学意义（P>0.05）。BrdU免疫荧光染色示手术组划痕周围细胞排列紊乱，分布不均；假手术组和对照组细胞排列分布均匀，无聚集现象。CD105免疫荧光染色示手术组划痕周围有较多阳性细胞聚集，细胞大小不一、分布不均；假手术组和对照组软骨层见少数阳性细胞，分布均匀。手术组术后各时间点CD105阳性细胞数均显著多于假手术组和对照组（P<0.05）；手术组内随时间延长CD105阳性细胞数逐渐增多，各时间点间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。CD105/整合素β1双荧光标记染色示手术组划痕周围有双标阳性细胞聚集，假手术组和对照组各时间点均未观察到双标阳性细胞。

结论 通过划痕能够建立大鼠软骨非全层损伤模型，且损伤无法完全修复。划痕造成的软骨损伤周围存在活化细胞聚集现象，细胞的活化与软骨基质改变关系不大；这些活化细胞处于增殖活跃状态，可同时表达CD105和整合素β1。