许飞翔  赵劲松  郭斌  马健超  黄岚峰

目的 研究动态培养条件下以BMSCs为种子细胞、温敏胶原（thermosensitive collagen hydrogel，TCH）为细胞黏附基质和聚乳酸（poly-L-lactic acid，PLLA）为支架材料体外构建的细胞-支架复合物形态及功能特征。

方法 分离Fischer344大鼠长骨来源的BMSCs，并体外扩增至第3代作为种子细胞，利用PLLA纤维编织材料作为支架，结合TCH为细胞黏附基质构建细胞-支架复合物。实验组和对照组细胞-支架复合物分别行动态培养和静态培养。体外培养7 d对两组复合物行大体观察和扫描电镜观察，检测培养0、1、3、7 d后复合物中总DNA含量。

结果  两种方式培养后胶原均包绕PLLA支架材料并形成致密的膜状结构。扫描电镜观察示，实验组复合物表面BMSCs呈梭形沿长轴排列整齐，细胞活性良好，表面可见绒毛凸起，纵断面见PLLA纤维之间充满胶原纤维和细胞；对照组复合物表面BMSCs呈延展状态，PLLA之间的细胞相对较少。体外培养1、3、7 d实验组细胞-支架复合物中总DNA含量均明显高于对照组（P<0.05）。与培养0 d比较，两组培养1、3、7 d的总DNA含量均逐渐升高，但仅7 d时总DNA含量与培养0 d比较差异有统计学意义（P<0.05）。

结论 利用TCH和PLLA纤维联合构建的复合细胞外基质具有良好的生物相容性，动态培养可促进BMSCs在材料表面和内部的分布，促进细胞增殖，可用于组织工程复合物的体外构建。