赛佳明  马学晓  邱晨生  陈伯华  胡有谷

目的：研究慢病毒载体GV115介导Caspase-3 siRNA转染人椎间盘髓核细胞的生物学效应。

方法：采集12例外伤致脊柱爆裂性骨折患者（22~36岁）术中切除的椎间盘髓核组织，采用组织块法分离培养髓核细胞并传代。取第2代髓核细胞，分为GV115-Caspase3 siRNA组、GV115组和对照组，各组12个细胞培养孔。在荧光显微镜下观察计数阳性髓核细胞，计算GV115-Caspase3 siRNA对人椎间盘髓核细胞的转染效率；采用免疫荧光法检测三组髓核细胞中Caspase-3表达；采用MTT法检测三组髓核细胞活性；采用Western-Blot法和Antonopulos法分别检测三组髓核细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖含量。

结果：椎间盘髓核细胞被成功分离培养，培养1周后细胞达到80%融合，进行传代培养。转染后1周（85.6±1.3）％的髓核细胞可被GV115-Caspase3 siRNA转染而表达绿色荧光素。GV115-Caspase3 siRNA组Caspase-3免疫荧光阳性细胞率[（19.4±3.2）%]较GV115组[（84.3±9.2）%]和对照组[（83.9±8.7）%]明显减少（P＜0.05），OD值（1.56±0.21）较GV115组（0.91±0.15）和对照组（0.92±0.17）高（P＜0.05），Ⅱ型胶原免疫印迹染色强度（1.32±0.09）较GV115组（0.81±0.05）和对照组（0.79±0.04）高（P＜0.05），蛋白多糖含量（0.56±0.09） 较GV115组（0.35±0.06）和对照组（0.34±0.05）高（P＜0.05）。

结论：GV115-Caspase3 siRNA可高效转染人椎间盘髓核细胞，增强髓核细胞的生物活性，并促进细胞外基质的合成。