殷杏  丛锐军  吴宇黎  符培亮  丁喆如  吴海山

目的: 检测利用慢病毒介导人β-防御素3（humanβ-defensin 3, hβD-3）基因转染人滑膜间质干细胞（synovium-derived mesenchymal stem cells, SMSCs）的安全性及体外抗菌活性。

方法: 通过膝关节镜手术获取人膝关节交叉韧带及滑膜组织以分离、培养SMSCs, 贴块法培养并用磁珠分选仪纯化, 通过显微镜观察、免疫荧光鉴定和细胞表面标记对细胞进行鉴定。通过成脂、成骨和成软骨分化诱导分别对细胞多向分化潜能进行测定。利用质粒构建包含hβD-3基因的慢病毒载体并转染SMSCs, 绘制细胞生长曲线, 采用流式细胞仪确定其DNA含量, 使用NOD/SCID小鼠验证其致瘤性。使用琼脂扩散法对转染后的SMSCs进行抑菌活性检测, 同时用兔膝关节内金黄色葡萄球菌感染模型验证其体内抑菌作用。

结果: 贴块法获得的SMSCs经分离纯化后表现出间质干细胞应有的结构和表面标志物, 具有多向分化潜能。免疫荧光证实被慢病毒转染的SMSCs能稳定表达hβD-3蛋白。增殖动力学、核型分析、致瘤型分析等证实转染后的SMSCs安全。重组细胞体外和动物模型体内抑菌活性检测显示, 传代后的SMSCs（采用P5代细胞）能稳定表达hβD-3并具有抗菌活性。与阴性、阳性对照组比较, 低浓度组有一定的抑菌活性, 并且随浓度增高, 抑菌圈逐渐增大。

结论: 经重组慢病毒载体感染的人SMSCs能安全稳定地传代并表达hβD-3, 体外具有明显的抗菌活性。