莫峰波  杨述华  叶树楠  孙志博

目的: 探讨5'-氮杂胞苷(5'-Azacytidine,5'-Aza-dc)对激素性股骨头坏死患者骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,h MSCs)增殖能力的影响及其对成骨、成脂分化能力的作用。

方法: 2012年8月~2013年4月,经患者知情同意和武汉协和医院伦理委员会审批后,选取22例激素性股骨头坏死患者和20例的股骨颈骨折患者,在严格无菌条件下抽取患者股骨骨髓,经密度梯度离心法体外分离、培养h MSCs,贴壁细胞传代,取第3代细胞实验,使用流式细胞仪进行细胞表面抗原标记物检测,确定最适5'-氮杂胞苷干预浓度后干预培养72 h,随后对三组h MSCs进行成骨、成脂分化诱导培养2周,接着对细胞进行碱性磷酸酶含量测定(alkaline phosphatase,ALP)、茜素红和油红O染色,分析实验结果。

结果: 激素性股骨头坏死组h MSCs集落形成能力比正常对照组有显著下降(P<0.001)。使用15μmol/L 5'-Aza-dc干预培养后能在一定程度上促进激素性股骨头坏死组h MSCs增殖能力,且干预培养72 h的h MSCs在成脂分化诱导培养2周后,通过油红O染色发现其成脂分化能力接近正常对照组,而5'-Aza-dc干预培养72 h的h MSCs在成骨分化诱导培养2周后,根据碱性磷酸酶检测、茜素红染色发现其成骨分化潜能较干预前明显提高,并接近正常对照组水平。

结论: 15μmol/L 5'-氮杂胞苷干预培养激素性骨坏死患者h MSCs,通过改变细胞成骨和成脂分化的平衡,能促进细胞的增殖能力,使成骨能力加强、成脂能力减弱。