马小妮  石文贵  谢艳芳  马慧萍  葛宝丰  甄平  陈克明

目的:建立水合氯醛去除成骨细胞初级纤毛的细胞模型, 并观察去除成骨细胞初级纤毛对电磁场提高成骨细胞ALP染色和钙化结节染色的影响。

方法:贴壁法分离培养3只出生3 d,体重6～9 g的雄性SD大鼠的乳鼠颅骨成骨细胞;待上述细胞生长至融合状态时传代培养并随机分成4组:不加水合氯醛组(对照组)、2 mM、4 mM和8 mM 水合氯醛处理组;将上述4组细胞置于37 ℃、5%CO₂的培养箱培养72 h,用激光共聚焦扫描显微镜观察初级纤毛形态, 并用Image-Pro Plus 6.0软件分析成骨细胞初级纤毛发生率;筛选出能有效去除成骨细胞初级纤毛的水合氯醛浓度的细胞, 并将其分为以下3组:正常对照组(control group,C),电磁场处理(electromagnetic fields,EMFs)组及电磁场处理+4 mM水合氯醛组。向上述3组细胞加入含10%FBS的DMEM培养液继续培养9 d,碱性磷酸酶组织化学染色观察ALP的形成;培养12 d,茜素红染色观察钙化结节的形成。

结果:与对照组和2 mM水合氯醛组相比, 4 mM水合氯醛能有效地去除成骨细胞初级纤毛的发生(P<0.01); 去除成骨细胞初级纤毛消弱了EMFs促进成骨细胞ALP和钙化结节的形成, 具体表现在:与EMFs组相比, EMFs+水合氯醛组ALP和钙化结节的染色面积明显减少(P<0.01).

结论:4 mM水合氯醛能有效去除成骨细胞的初级纤毛;初级纤毛部分参与了电磁场促进成骨细胞ALP和钙化结节的形成, 为探讨电磁场促进成骨细胞成熟矿化的机理提供新思路。