路玉峰  俞庆声  郭万首  程立明  张韫

目的：探讨培养人股骨头骨微血管内皮细胞分离培养方法。

方法：2013年10月至2014年1月15例行髋关节置换患者切除的内部无病变的股骨头，男2例，女13例；年龄38～92岁，平均71.2岁。无菌条件下将股骨头内松质骨咬成碎骨粒，放入培养基。采用酶消化法，密度梯度离心法分离细胞；差速贴壁法，选择性培养基法纯化细胞。倒置显微镜观察细胞特点，并采用vWF、CD31免疫荧光进行细胞鉴定。

结果：原代培养24 h后倒置显微镜下观察细胞数量与患者年龄呈正相关，年龄越大细胞越少。培养4～5 d细胞呈短梭形、多角形或“鹅卵石”状。培养7～10 d细胞生长密集，细胞融合呈漩涡状，接触抑制明显。vWF、CD31免疫荧光检测阳性率100%，表明细胞为骨微血管内皮细胞。

结论：人股骨头骨微血管内皮细胞分离培养方法简单、稳定、有效、可重复性好，可以获得纯度较高的股骨头骨微血管内皮细胞。