王晓旭  翟溶凡  杨俊涛  周寿红  谭文甫  谭光华

目的：探讨腺病毒介导TGF-β1基因转染腘绳肌腱对兔前交叉韧带（anterior cruciate ligament，ACL）重建术后腱-骨愈合组织形态学的影响。

方法：取重组腺病毒载体AdTGF-β1与腺病毒空载体AdGFP，以DMEM培养液稀释其滴度至5×108 PFU/mL。取新西兰大白兔48只，体质量1.6～2.5 kg，随机分为 A、B、C 3组（n=16），以兔右后肢膝关节制备自体同侧腘绳肌腱重建ACL模型；ACL重建前A、B组腘绳肌腱分别以AdTGF-β1与AdGFP转染培养12 h，C组以DMEM培养作为对照。转染后12 h，荧光显微镜观察A、B组腘绳肌腱绿色荧光表达，ELISA检测A组腘绳肌腱中TGF-β1蛋白含量。重建术后观察各组动物一般情况，并于2、4、8、12周取材行HE及Masson染色，计数腱-骨界面成纤维细胞以及参照Buark评价分级标准对腱-骨愈合进行评价。

结果：A、B组腘绳肌腱转染培养后，均可见绿色荧光表达；A组转染12 h时腘绳肌腱组织中TGF-β1蛋白表达量为（221.0±12.2） ng/ mL。组织学观察示：A 组术后腱-骨界面见成纤维细胞生成及胶原纤维逐渐增多，Sharpey纤维逐步形成；至12周时界面区见到规整Sharpey纤维，部分区域组织有直接愈合倾向。而B、C 组移植肌腱与骨隧道间成纤维细胞较A组少且腱-骨连接疏松；至12 周时界面区组织未见直接愈合倾向。各时间点A 组腱-骨界面成纤维细胞计数以及腱-骨愈合分级均显著优于B 、C 组，比较差异有统计学意义（P<0.05）；B、C 组间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。

结论：腺病毒介导TGF-β1基因转染方法可促进自体腘绳肌腱重建兔ACL术后腱-骨愈合。