孙振  尹合勇  眭翔  余晓明  彭江  王玉  汪爱媛  郭全义  刘舒云  孟昊业  卢世璧

目的：介绍一种不脱钙骨组织的冰冻切片法，通过观察骨和软骨内的荧光分布，探讨该方法的可行性。

方法：取健康成年雄性绿色荧光蛋白转基因SD大鼠膝关节，经包埋剂包埋，置于冰冻切片机中，将表面涂有合成橡胶的薄膜黏附于包埋块表面，行膝关节组织切片。荧光显微镜及光镜下观察切片组织内荧光表达及结构；并行Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫荧光染色和HE、甲苯胺蓝、茜素红染色，观察软骨及骨的结构及荧光分布特征。

结果：制备的大鼠膝关节冰冻切片厚度均为6 μm，大体观察示关节各结构均完整切割，光镜下能清晰分辨切片软骨各层细胞形态以及软骨下骨、骨小梁排列走行。荧光显微镜下观察，可见关节周围软组织、软骨及骨组织呈绿色荧光，Ⅰ型胶原在骨组织表达，Ⅱ型胶原在软骨组织表达。HE染色及甲苯胺蓝染色能清晰分辨软骨层形态结构。茜素红染色示软骨下骨板、半月板内部组织结构完整，而且胫骨近端的皮质骨连续性存在。

结论：采用冰冻切片法制备不脱钙骨组织切片，可直接观察骨、软骨组织内荧光物质的分布，缩短骨组织切片的制备周期。