宋登新  曹云  丁徐  何小文  黄涛  赵毅  祁军

目的：比较OA与正常膝关节滑膜细胞中高迁移率族蛋白1（high mobility group box chromosomal protein 1，HMGB1）的差异，探讨HMGB1在OA中的作用。

方法：取OA与正常膝关节滑膜组织，采用组织块培养法分离培养关节滑膜细胞，倒置相差显微镜下观察细胞形态，应用免疫荧光染色、免疫组织化学染色以及Western blot检测比较两种滑膜细胞HMGB1表达差异。构建HMGB1小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）的真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA，转染至OA滑膜细胞中（siRNA转染组），以Pgenesil-1质粒转染至OA滑膜细胞（空载体转染组），以OA滑膜细胞（未转染组）作为对照。Western blot检测各组OA滑膜细胞中HMGB1蛋白的表达，ELISA法检测各组滑膜细胞培养上清液中IL-1β及TNF-α含量。

结果：原代培养的OA与正常膝关节滑膜细胞呈长梭状，为成纤维细胞样细胞。免疫组织化学染色及免疫荧光染色观察示，OA滑膜细胞中HMGB1以细胞质分布为主、细胞核中较少，而正常滑膜细胞则相反。Western blot检测示，OA滑膜细胞中HMGB1高表达，表达量为0.687±0.025，显著高于正常滑膜细胞的0.172±0.030（t=32.159，P=0.000）。酶切鉴定显示成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA。Western blot检测显示，siRNA转染组HMGB1蛋白表达为0.134±0.048，显著低于空载体转染组的0.581±0.032及未转染组的0.514±0.069（P<0.05）。ELISA法检测siRNA转染组IL-1β及TNF-α含量均显著低于空载体转染组及未转染组（P<0.05）。

结论：膝关节滑膜细胞中HMGB1表达的上调和表达位置的改变（从细胞核移位至细胞质）与OA密切相关，应用siRNA技术抑制HMGB1表达可明显降低OA滑膜细胞分泌IL-1β和TNF-α的能力，延缓OA的炎性反应。