朱厚毅  王运涛  王锋  时睿  宋鹏  康新贵

目的：对大鼠腰椎及尾椎间盘髓核细胞（nucleus pulposus cells，NPCs）进行体外分离培养、形态学鉴定，并对比研究细胞生长特性。

方法：分别取8周龄SD大鼠腰段（L1、2～L6、S1）及尾段（C1、2～C17、18）椎间盘，采用组织贴壁法分离培养NPCs；倒置相差显微镜观察细胞形态变化，行HE、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察；分别取两组第1～5代细胞测定细胞活力（锥虫蓝染色）、总蛋白含量（BCA法） 及衰老水平[衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associated β-galactosidase，SA-β-gal）染色]；取第1代细胞行增殖能力（细胞计数试剂盒8法）测定。

结果：成功分离培养各节段椎间盘NPCs。尾段原代NPCs贴壁时间及生长达90%融合时间显著少于腰段原代NPCs（P<0.05）。HE染色示NPCs细胞质呈粉色，细胞核呈卵圆形，均一蓝黑色；甲苯胺蓝染色示NPCs细胞质呈蓝色；Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示细胞质见黄褐色颗粒沉着核周区显著，细胞核呈蓝黑色。腰段组细胞以长梭形为主，尾段组以多角形、不规则形为主。细胞活力测定示腰段及尾段两组间及两组内各代次间NPCs活力比较差异均无统计学意义（P>0.05）。增殖能力检测示，腰段细胞培养4～5 d后进入对数生长期，尾段细胞培养3 d后即进入对数生长期；培养3～9 d尾段细胞吸光度（A）值高于腰段细胞（P<0.05）。总蛋白合成检测示，尾段及腰段NPCs总蛋白含量组内各代次间比较差异均无统计学意义（P>0.05），尾段各代NPCs总蛋白含量均显著高于同代腰段NPCs （P<0.05）。衰老水平检测示，两组间第1、2、3代比较老化细胞阳性率差异无统计学意义（P>0.05），腰段组第4、5代老化细胞阳性率较同代尾段细胞高，差异有统计学意义（P<0.05）。

结论：与同时间点大鼠腰椎间盘NPCs相比，尾椎间盘NPCs生长状态更佳，更适宜作为研究椎间盘退变的种子细胞。