wrap531α基因在顺铂诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡中的作用研究

2015-09-18   文章来源:袁建敏 徐祝军 谢加兵 杨民 汪正宇 朱劲松    点击量:693 我要说

  目的:探讨wrap531α基因表达对顺铂诱导的骨肉瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。

  方法:采用不同浓度的顺铂(CDDP)处理骨肉瘤细胞U-2OS 36小时,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测wrap1α和wtp53基因的mRNA和蛋白表达;构建针对于wrap531α的干扰质粒,脂质体转染至人骨肉瘤细胞株U2OS细胞,选择10μM CDDP处理上述细胞36小时,分别检测wrap1α和wtp53基因的mRNA和蛋白表达。采用流式细胞仪检测U-2OS细胞在CDDP和干扰质粒处理后凋亡水平变化。

  结果:当浓度在5至20 μM的CDDP处理U-2OS细胞36小时后,wrap531α mRNA出现3到39倍的CDDP剂量依赖性增长,而P53 mRNA也出现大约2倍的增长;在使用针对wrap531α外显子设计的siRNAs处理U2OS细胞后,再用10μM CDDP处理 U-2OS细胞36小时,wrap531α表达水平降低,p53 mRNA减少约50%,western-blo检测到P53蛋白水平明显降低。进一步的流式细胞检测提示相对于单纯10μM CDDP处理后的细胞凋亡,在预先干扰wrap531α后,U-2OS细胞在10μM CDD处理后的凋亡水平明显降低。

  结论:在顺铂诱导骨肉瘤细胞的凋亡过程中wrap531α基因水平与p53蛋白表达水平明显增高,在干扰wrap531α基因后,wrap531αmRNA水平与p53蛋白水平明均明显降低,并且由顺铂诱导的细胞凋亡水平明显减低,这一结果提示wrap531αmRNA在顺铂诱导的U-2OS细胞凋亡中具有十分重要的作用,其具体机制可能与wrap531αmRNA调控p53表达有关。


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