目的 柚皮苷是中药骨碎补的主要成分，近些年来随着现代中药研究的发展，关于骨碎补主要成分柚皮苷的研究成为热点，课题组前期证明柚皮苷可以单独促进成骨细胞的增殖以及促进间充质干细胞向成骨细胞分化以及抑制破骨细胞的凋亡，但是机体内成骨细胞破骨细胞处于偶联状态，因此我们借助Transwell小室研究共培养体系下柚皮苷对成骨及破骨细胞活性的影响。

　　方法 通过100 ng/mL 核因子κB受体活化因子配体RANKL诱导RAW264.7细胞株为成熟破骨细胞，HE染色、TRAP染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定。将成熟破骨细胞以4×104密度种在Transwell下室。碱性磷酸酶(ALP)染色法及HE染色以及ALP活性对成骨细胞株MC3T3-E1进行鉴定，成骨细胞株以2×104种在Transwell上室，同时加入不同浓度的柚皮苷(0μg/ml,2μg/ml,20μg/ml 200μg/ml)，共培养5天后对下室破骨细胞进行TRAP染色，并以细胞核≥3个为阳性细胞，对骨吸收陷窝运用甲苯胺蓝染色后运用Image Pro plus进行骨吸收陷窝的面积进行定量分析。运用MTT法检测上室成骨细胞的增殖情况，ALP Elisa试剂盒检测以及ALP染色分析成骨活性，免疫组化染色检测OPG和RANKL的表达情况。同时收集上室成骨细胞及下室破骨细胞，检测成骨细胞相关OPG、RANKL、CON、COL及RunX2的表达，破骨细胞TRAP、NFATc1和NFATc2及Cath-K的基因表达情况。

　　结果 共培养5天后，MTT及Elisa结果显示2μg/ml, 200μg/ml的柚皮苷组较对照组均可以明显促进成骨细胞的增殖和ALP的活性，促进OPG、RANKL、CON、COL及RunX2的基因表达，其下室破骨细胞个数及骨吸收陷窝面积及深度小于对照组，破骨细胞TRAP、NFATc1和NFATc2下调，Cath-K基因表达上调，差异有统计学意义(P<0.05)。其中20μg/ml柚皮苷浓度组效果最明显。免疫组化结果显示，柚皮苷可以降低OPG/RANKL的比值，其中以20μg/ml剂量效果最明显。

　　结论 在共培养条件下，柚皮苷单体可以促进成骨细胞增殖及ALP活性，抑制破骨细胞骨吸收活性，这可能通过下调OPG/RANKL的比值来发挥作用。