王瑾　　陈其昕　　陶轶卿　　李方财

　　目的：比较不同胶原支架中髓核间充质干细胞（NPMSCs）的细胞存活、增殖能力和分化相关基因及蛋白表达等方面的差异。

　　方法：在体外构建Ⅰ型、Ⅰ/Ⅱ型混合和Ⅱ型胶原支架，观察其显微结构、孔隙率及降解特性。从健康雄性大鼠尾椎提取NPMSCs，分别采用细胞微球、Ⅰ型胶原、Ⅰ/Ⅱ型混合胶原、Ⅱ型胶原支架培养，其中细胞微球作为对照。通过乳酸脱氢酶（LDH）检测材料生物毒性，CCK-8测定细胞增殖，实时定量PCR和Western Blot测定SOX9、聚集蛋白聚糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的基因和蛋白表达水平，阿尔新蓝组织学染色检测硫酸蛋白聚糖的表达。

　　结果：Ⅰ型、Ⅰ/Ⅱ型混合和Ⅱ型胶原支架孔隙率均为90%以上，构建21d后的降解率分别为（10.30±0.66）%、（9.87±0.71）%和（10.40±0.53）%。培养后7d细胞LDH检测结果Ⅰ型、Ⅰ/Ⅱ型混合和Ⅱ型胶原支架组分别为12.24±0.65、12.13±1.03、12.67±1.15，与对照组12.50±1.32比较无显著性差异（P>0.05）。胶原支架中培养5d及7d的细胞CCK-8检测结果（Ⅰ型胶原组为0.67±0.04、1.20±0.05，Ⅰ/Ⅱ型混合胶原组为0.62±0.05、1.20±0.07，Ⅱ型胶原组为0.69±0.02、1.34±0.04）明显高于对照组（0.53±0.03，1.02±0.02）（P<0.05）。培养21d后，三种胶原支架组与对照组比较，SOX9、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖的基因表达均显著上升（P<0.05），其中Ⅱ型胶原支架组上述基因表达量最高，与Ⅰ型及Ⅰ/Ⅱ型混合胶原支架组有显著性差异（P<0.05）；与对照组比较，Ⅰ型胶原支架组中仅Ⅰ型胶原及聚集蛋白聚糖的蛋白表达上升（P<0.05）；Ⅰ/Ⅱ型混合及Ⅱ型胶原支架组中SOX9、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖的蛋白表达有显著上升（P<0.05），其中Ⅱ型胶原支架组上述蛋白表达量最高，且与Ⅰ型及Ⅰ/Ⅱ型混合胶原支架组有显著性差异（P<0.05）。阿尔新蓝组织学染色检测硫酸蛋白聚糖在Ⅱ型胶原支架组表达明显高于其余各组。

　　结论：Ⅰ型胶原、Ⅰ/Ⅱ型混合胶原、Ⅱ型胶原支架均促进NPMSC的分化，而Ⅱ型胶原支架促进NPMSC成髓核细胞分化作用尤为显著。Ⅱ型胶原是髓核组织工程学的理想生物支架材料。