马健  李放  任大江  吴坤  万中元  李进珍

摘要：目的  探讨以自体富含血小板血浆（PRP）凝胶复合脂肪间充质干细胞（ADSCs）构建可注射组织工程髓核的可行性。 方法  将体外扩增的第3代兔ADSCs经流式细胞仪鉴定后接种至自体ＰＲＰ凝胶中，体外立体培养2周、4周、8周时分别行大体观察、组织学检查、5-溴-2-脱氧尿嘧啶（BrdU）免疫荧光法观察细胞在PRP凝胶中的分布及存活情况；分光光度法检测PRP凝胶-细胞复合体中糖胺聚糖（GAG）含量，实时荧光定量PCR法检测低氧诱导因子（HIF-1α）、蛋白多糖（Aggrecan）、Ⅱ型胶原（Collagen Ⅱ）基因表达情况。 结果  流式细胞仪检测显示体外扩增的第3代细胞CD90阳性率为95.2%，CD45阳性率为0.9%。培养2、4、8周时PRP凝胶细胞复合体均为表面光滑的凝胶状，弹性较好；番红O染色2周时细胞外基质几乎不着色，4周时可见细胞周围呈粉色的弱阳性染色，　8周时多数细胞周围呈红色阳性染色。HE染色和扫描电镜各时间点均可见细胞均匀分布于网络状支架内；BrdU免疫荧光法显示细胞在支架中生存状态良好，培养4周时阳性细胞数较培养2周时明显增多（P<0.05），8周时较4周时明显增多（P<0.05）。培养4周时GAG含量较培养2周时明显增高（P<0.05），8周时较4周时明显增高（P<0.05）；培养4周时与培养2周时比较3个目的基因mRNA表达量均增高，差异有显著性（P<0.05），8周时与4周时比较亦明显增高（P<0.05）。 结论  以兔自体PRP凝胶与ADSCs构建的复合体在体外培养时细胞可以向类髓核样细胞分化，用此方法构建可注射组织工程髓核具有可行性。