目的：采用siRNA技术靶向沉默软骨细胞leptin受体Ob-Rb基因表达，抑制前炎性因子的表达及leptin下游信号传导，最终抑制关节软骨破坏，从而为临床OA的基因治疗提供实验基础及新思路。

方法：1. 人关节软骨细胞的获取及培养：
　　取全膝关节置换术的 OA 患者股骨髁及胫骨平台关节软骨。标本取下后立即分离消化得到关节软骨细胞，用含20％胎牛血清（FBS）的常规培养基培养。
　　2. 人关节软骨细胞的观察和鉴定：
　　原代培养细胞生长融合率达90%以上进行1:3传代培养操作，倒置显微镜下观察各代细胞形态学特征，同时准备细胞爬片对各代细胞II胶原免疫组化染色、甲苯胺蓝染色及番红O染色行细胞鉴定。
　　3. 人关节软骨细胞转染
　　1） 通过生物信息学获得人leptin受体Ob-Rb的基因序列，设计靶向Ob-Rb基因的siRNA（设计合成3组）
　　2）优化转染条件，摸索对人关节软骨细胞最佳的转染条件
　　3）人软骨细胞转染

　　a、实验分组，在软骨细胞培养到70-80％聚集时进行转染
　　组一、将3组Ob-Rb siRNA转染关节软骨细胞
　　组二、相应阳性对照siRNA转染关节软骨细胞
　　组三、相应阴性对照siRNA转染关节软骨细胞
　　组四、关节软骨细胞空白对照组，不加任何转染试剂
　　采用RT-PCR和实时荧光定量PCR（Q-PCR）技术筛选出Ob-Rb沉默效果最好的一组siRNA进行后期实验（实验分组同前）。
　　b、各组分别在转然后24、48、72小时应用Q-PCR/Western Blot检测Ob-Rb基因mRNA及蛋白的表达量、应用Western Blot检测collagen II基因的蛋白表达量、应用RT-PCR检测前炎性因子基因(INFγ，NO、IL-1β、和 MMP-1)的mRNA表达量。

　　结果：经过筛选得出siRNA1的沉默效果是最好的。转染后实验组与对照组比较不同时间点Ob-Rb的mRNA及蛋白较表达均有降低，四种前炎性因子的mRNA也有不同程度的下降，而collagen II的蛋白表达量则有不同程度的上升。

　　结论：采用siRNA可下调OA患者膝关节软骨细胞Ob-RbmRNA及蛋白表达量，并阻断 leptin对下游前炎性因子的诱导作用，促进collagen II的合成，减轻关节软骨的破坏，为OA的治疗提供了潜在的新思路。

　　关键词：骨关节炎；leptin；受体；转染；软骨