靶向肝素酶基因沉默抑制骨肉瘤细胞侵袭和转移的实验研究

2015-04-13   文章来源:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科 邵增务 范磊等    点击量:612 我要说

  目的:研究小分子干扰RNA(siRNA)靶向沉默人骨肉瘤细胞(MG63)中乙酰肝素酶基因对于细胞增殖、侵袭和促进血管形成等活性的影响。

  方法:根据siRNA 原理针对乙酰肝素酶mRNA设计短发卡状RNA(shRNA),合成两条互补的寡核苷酸链,接入pGenesil质粒构建固定表达载体,瞬时转染入人骨肉瘤细胞(MG63),分为空白对照组、空载体pGenesil 转染组、pGenesil-shRNA转染组三组,RT-PCR及Western blot法检测骨肉瘤细胞中肝素酶基因表达水平,MTT 增殖实验检测细胞的增殖情况,粘附实验和transwell小室实验检测细胞游走、侵袭能力,小管形成实验检测细胞分泌介质促进血管形成能力。

  结果:转染后重组质粒转染组细胞的乙酰肝素酶mRNA 表达下降76.1%(P<0.01),蛋白表达下降75.3%(P<0.01),细胞增殖,粘附,侵袭及促进血管形成能力都有明显下降,有统计学意义。

  结论:靶向乙酰肝素酶基因沉默可以有效抑制人骨肉瘤细胞体外增殖、粘附、侵袭和促血管形成能力。


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