年争好　　孙凯　　李晖　　李东　　徐成　　张新昌　　张西正　　李瑞欣

　　目的:利用诱导成骨分化的骨髓间充质干细胞（bone marrowmesenchymal stem cells, BMSCs）复合生物支架材料构建组织工程骨组织。

　　方法:采用密度梯度离心法获取大鼠骨髓间充质干细胞，原代培养扩增后，条件培养基诱导成骨分化作为实验组，并设非条件培养基培养为对照组。诱导培养后，通过碱性磷酸酶、钙结节染色；Ｉ型胶原、骨钙素检测鉴定成骨性。将诱导的BMSCs利用滴加法种入自制组织工程生物支架复合培养，采取扫描电镜、HE切片染色观察培养8天时细胞在支架内部的生长情况。

　　结果:密度梯度离心法获取培养的原代骨髓间充质干细胞呈梭形或三角形贴壁生长，以梭形为主；经成骨诱导剂诱导后细胞呈多角形贴壁生长，碱性磷酸酶染色呈阳性、茜素红染色出现阳性的钙化结节；Western blotting检测Ⅰ型胶原蛋白表达较对照组明显增加（P<0.05）；ELISA法检测骨钙素结果较对照组明显升高（P<0.01）。HE切片染色可见支架内部有细胞长入，细胞呈圆形或椭圆形。扫描电镜可见支架内部有大量细胞长入，细胞粘附、生长良好，呈现完全伸展状态，细胞-支架-细胞之间有基质连接。

　　结论:本实验获取的原代细胞为骨髓间充质干细胞，诱导剂诱导后成功分化为成骨细胞。采用经诱导成骨后的细胞作为组织工程骨构建的种子细胞，与三维支架材料复合后共培养，使构建的组织复合物更接近骨组织，为临床大段骨缺损的修复增加可能性。