张紫机　　康焱　　张志奇　　杨子波　　方淑莺　　盛璞义　　何爱珊　　傅明　　廖威明

　　目的:探讨微小RNA（microRNA，miRNA）在人脂肪来源干细胞（human adipose-derived stem cells，hADSCs）诱导成软骨分化过程中的表达规律及其影响软骨分化的可能机制。

　　方法:取行抽脂术或其他腹部手术患者自愿捐赠的脂肪组织，分离、培养hADSCs并鉴定。取第3代细胞成软骨分化，倒置相差显微镜下观察细胞形态，于诱导21 d行阿尔新蓝染色观察软骨形成情况，诱导0、7、14、21 d行ELISA检测成软骨相关蛋白Ⅱ型胶原蛋白（collagen type Ⅱ，Col2a1）、蛋白聚糖（Aggrecan）、Col10a1以及硫酸软骨素表达。采用基因芯片技术筛选hADSCs成软骨诱导前及诱导后21 d差异性表达miRNA，并预测筛选出的miRNA靶基因。

　　结果:实验成功培养hADSCs，经成软骨诱导培养后，随时间延长可形成软骨球；21 d阿尔新蓝染色呈阳性；hADSCs成软骨诱导后7、14、21 d，Col2a1、Aggrecan、Col10a1及硫酸软骨素表达水平均较成软骨诱导前hADSCs显著增高，差异均有统计学意义（P<0.05）。基因芯片技术共筛选出11个差异性表达miRNA，其中7个miRNA表达上调，4个miRNA表达下调。筛选出的成软骨相关miRNAs预测靶基因可能参与了干细胞成软骨分化、增殖、凋亡、细胞周期调控，以及介导细胞内级联反应和自我更新等。

　　结论:实验筛选出11个成软骨分化差异性表达超过2倍的miRNAs，并对其靶基因进行预测，加深了对hADSCs成软骨分化机制的理解，为定向控制hADSCs成软骨分化及筛选组织工程改良种子细胞提供了理论依据。