王运涛　　吴小涛　　王锋　　朱厚毅　　王小虎　　时睿

　　目的:探讨同一年龄段、不同程度腰椎间盘退变患者髓核中p16INK4a的表达，明确其与椎间盘退变的关系，为退变椎间盘的生物学修复提供依据。

　　方法:收集腰椎间盘退变患者退变髓核标本17例，年龄40～50岁；退变按Pfirrmann分级为Ⅲ级10例、Ⅳ级7例。检测衰老相关-β-半乳糖苷酶（senescence-associated β-galactosidase，SA-β-gal）活性，评价细胞衰老情况；免疫组织化学染色和Western blot检测聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、含血小板凝血酶敏感蛋白的解聚素与金属蛋白酶5（A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5，ADAMTS 5）、Sry相关的HMG盒转录因子9（Sry-related HMG box transcription factor 9，Sox-9）、p16INK4a蛋白表达。采用Bivariate过程分析ADAMTS 5和p16INK4a蛋白表达的相关性。

　　结果:Ⅲ、Ⅳ级髓核组织内均可见到绿染的SA-β-gal阳性髓核细胞（nucleus pulposus cells，NPCs），多呈簇状分布，其中Ⅲ级中也可见少量单个分布的绿染NPCs，呈圆形，其外周由多层细胞外基质包裹，而Ⅳ级中难以见到单个分布的绿染NPCs；Ⅲ、Ⅳ级髓核组织阳性细胞百分比分别为22.7% ± 5.4%和37.1% ± 7.6%，差异有统计学意义（t= —9.666，P=0.000）。免疫组织化学染色和Western blot检测示，Ⅳ级髓核组织中p16INK4a、ADAMTS 5染色阳性细胞百分比和蛋白相对表达量明显多于Ⅲ级，而Aggrecan、Sox-9明显少于Ⅲ级，差异均有统计学意义（P < 0.05）。退变髓核组织中ADAMTS 5与p16INK4a的蛋白表达成线性相关（r=0.908，P=0.000）。

　　结论:过早衰老NPCs的累积与椎间盘退变程度密切相关，p16INK4a参与的NPCs过早衰老对椎间盘退变进程起着主导作用。