赵荣兰　　彭效祥　　楚海荣　　宋伟　　刘庆

　　目的:探讨可磷酸化短肽（phosphorylatable short peptide，pSP）偶联壳聚糖（chitosan，CS）（pSP-CS），携载IGF-1和IL-1受体拮抗剂（IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra） 基因，局部转染促进关节软骨损伤修复的作用。

　　方法:构建pBudCE4.1-IL-1Ra、pBudCE4.1-IGF-1及 pBudCE4.1-IL-1Ra + IGF-1质粒，以pSP偶联CS形成pSP-CS，将以上重组质粒分别与其复合形成 pSP-CS/质粒DNA（pDNA）复合物。取3月龄健康雄性新西兰大耳白兔30只，体重2.0～2.5 kg，双侧后肢随机分为5组（n=12）。假手术组（A组）仅暴露股骨外侧髁关节面，pSP-CS/pBudCE4.1干预组（B组）、pSP-CS/pBudCE4.1-IL-1Ra干预组（C组）、pSP-CS/pBudCE4.1-IGF-1干预组（D组）、pSP-CS/pBudCE4.1-IL-1Ra + IGF-1干预组（E组）制备膝关节外侧髁软骨缺损模型。术后1周，各干预组给予对应pSP-CS/pDNA复合物，共7周；A组注射等量生理盐水。术后观察动物一般情况，8周时处死实验动物，取关节腔灌洗液ELISA分析IL-1Ra及IGF-1含量；实时荧光定量PCR检测缺损区软骨组织聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、基质金属蛋白酶3（matrix metalloproteinase 3，MMP- 3）、MMP抑制剂 1（MMP inhibitor 1，TIMP-1）mRNA表达；阿尔辛蓝-过碘酸雪夫（alcian blue-periodic acid/schiff，AB-PAS）染色及Aggrecan免疫组织化学染色鉴定损伤区新生细胞的软骨细胞表型，分析Aggrecan染色吸光度（A）值。

　　结果:实验动物术后无感染及死亡。各干预组关节腔灌洗液中检测到大量外源蛋白IGF-1和IL-1Ra，其中D、E组IGF-1含量以及C、E组IL-1Ra含量显著高于A组（P < 0.05）。E组Aggrecan和TIMP-1 mRNA表达上调， MMP-3 mRNA表达下调，明显优于C、D组（P < 0.05）。C、D、E组缺损处出现不同程度软骨性修复，AB-PAS染色及Aggrecan免疫组织化学染色均为阳性，且E组作用明显优于C、D组（P < 0.05）；B组缺损处仅被大量纤维组织增生和炎性细胞浸润，未见明显软骨性修复。

　　结论:pSP-CS是一种较理想的基因载体，可携载治疗基因有效进入兔关节软骨组织；IL-1Ra与IGF-1协同作用明显促进损伤软骨修复。