姜未　　雷光华　　林博文　　王华　　吕猛　　高曙光　　张方杰　　曾超

　　目的:探讨骨桥蛋白（osteopontin，OPN）对人膝骨关节炎软骨细胞基质金属蛋白酶13（matrix metalloproteinase 13，MMP-13）表达的影响，并确定OPN干预的最佳时间和浓度。

　　方法:采用原发膝骨关节炎患者自愿捐赠的膝关节软骨，Ⅱ型胶原酶一步消化法分离培养软骨细胞，并行Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定。取第1代软骨细胞，分别以1 μg/mL浓度的OPN干预培养0、24、48、72 h，以及0、0.5、1、2、4 μg/mL浓度的OPN干预培养48 h；实时荧光定量PCR和Western blot检测MMP-13 mRNA和蛋白表达水平。

　　结果:免疫组织化学染色鉴定示Ⅱ型胶原染色呈阳性。经1 μg/mL OPN干预培养后，软骨细胞MMP-13 mRNA及蛋白表达水平均呈升高趋势，48 h时达峰值，各时间点间比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。不同浓度OPN干预培养48 h 后，1 μg/mL组MMP-13 mRNA表达水平较其余组显著上升（P < 0.05），蛋白表达水平亦显著升高，但仅与0 μg/mL比较差异有统计学意义（P < 0.05）；0.5、2、4 μg/mL组仅MMP-13蛋白较0 μg/mL组显著上升，差异有统计学意义（P < 0.05）。

　　结论:OPN可明显上调人膝骨关节炎软骨细胞MMP-13表达，且具备时间和浓度依赖性，干预最佳时间及浓度分别为48 h及1 μg/mL。