骨髓基质干细胞定向分化为神经细胞及分化后细胞功能特征的研究
第一作者:骨科在线
2011-07-07 点击量:878 我要说
摘要:目的 探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)定向分化为神经细胞的潜能及分化后细胞的功能特征。方法 体外分离、扩增、纯化Sprague-Dawley大鼠BMSCs,取第6代细胞接种并随机分为4组,实验组A、B、C组开始每组加预诱导夜(含预诱导剂碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子),6d后A组继续加预诱导夜,其余两组在预诱导后加定向诱导剂(音猬因子和维甲酸)时选择是否保留预诱导液分为B组(保留)和C组(去除);D组不做任何干预,为空白对照组。采用细胞免疫荧光化学法检测分化后神经样细胞的形态和功能标志。结果 接种后的细胞迅速贴壁,加预诱导液6d细胞增殖迅速,且可以观察到有类似神经干细胞的克隆团形成。在诱导剂的特定组合和时序的诱导下,A、B、C组均出现胞体收缩和突起伸出,呈现神经元细胞样改变。D组细胞形态基本没有变化。6~12d,B组微管相关蛋白-2(MAP-2)阳性细胞率为59.17%±1.84%,胶质酸性蛋白(GFAP)阳性细胞率为22.10%±1.03%;C组MAP-2阳性细胞率为29.35%±4.85%,GFAP为36.35%±4.85%,A组和D组均未检测到上述细胞标志物。12~18d,A组仅出现少量GFAP阳性细胞;B组MAP-2、GFAP阳性细胞率分别为72.54%±1.02%、21.54%±1.02%;C组MAP-2、GFAP阳性细胞率分别为31.02%±2.37%、23.45%±3.74%。神经细胞的功能标志胆碱乙酰转移酶、囊泡乙酰胆碱通道只有B组表达,12~18d后阳性细胞率分别为45.11%±3.04%、28.22%±1.72%。结论 BMSCs在体外能定向诱导为具有一定功能的神经细胞,为脊髓损伤后细胞移植治疗奠定了基础。