吕涵宁　徐国娇　盖昱辛　陈礼　刘舒云　赵鹏　卢世璧　张莉　郭全义　杨建华

　　目的：将软骨细胞复合于人脐带Wharton胶取向支架，体外评估该支架对软骨细胞的影响和作用。

　　方法：取成年新西兰大白兔肩关节软骨组织分离培养软骨细胞。取正常新生儿脐带组织，通过湿润粉碎结合化学脱细胞技术脱细胞，利用冷冻干燥及交联等技术制备人脐带Wharton胶取向支架。取第2代软骨细胞与人脐带Wharton胶取向支架复合培养，倒置显微镜、扫描电镜观察细胞在支架上分布及黏附情况；甲苯胺蓝、番红O染色观察细胞细胞外基质分泌情况；二乙酰荧光素-碘化丙啶双色荧光检测法染色及Hoechst33258染色评估细胞在支架上的活力及增殖情况；将体外PKH26荧光标记的软骨细胞与支架复合培养，荧光显微镜观察。

　　结果：倒置显微镜观察示，培养3 d细胞在支架孔隙内分布较均匀，呈圆形或椭圆形；扫描电镜观察示，培养7 d大量细胞黏附于支架孔隙间，呈圆形或椭圆形，且细胞沿取向孔道伸展排列，相互聚集，增殖旺盛；组织学观察示，培养7 d，细胞在支架中分布均匀且增殖旺盛，细胞分泌大量细胞外基质，取向支架能引导细胞迁徙和增殖，并能有效保留和促进细胞外基质分泌；细胞活力评估结果示，培养3 d见支架上黏附的大部分细胞为活细胞，细胞成活率高达90%以上。荧光显微镜观察示，荧光标记细胞与支架复合培养1 d，细胞在支架内部均匀分布，增殖旺盛。

　　结论：人脐带Wharton胶取向支架具有良好的亲和性和细胞相容性，有利于软骨细胞黏附和增殖，细胞存活率高，是一种比较理想的软骨组织工程支架材料。