幸嵘　孔清泉　项舟　杨婧　罗静聪　邓力　解慧琪　

　　目的：通过对C3H10T1/2细胞进行成骨及成软骨分化，利用微小RNA（microRNA，miRNA）芯片技术筛选成骨分化和成软骨分化中差异miRNA，以期寻找调节C3H10T1/2细胞成骨及成软骨分化的特异性miRNA。

　　方法：取C3H10T1/2细胞系，分别行成骨和成软骨诱导分化，对诱导组和对照组进行鉴定。然后通过miRNA芯片技术筛选分化前后2倍变化幅度且平均标准化信号值> 2的差异miRNA，并行实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）验证。

　　结果：诱导7 d成骨诱导组较对照组有明显ALP表达（P < 0.05）；诱导7、14、21 d，RT-qPCR检测成骨诱导组成骨标志物Runx2、丝氨酸蛋白酶7（serine protease 7，Sp7）、Ⅰ型胶原、骨桥蛋白（osteopontin，OPN） mRNA相对表达量均显著高于诱导0 d时（P < 0.05）；诱导21 d，Western blot检测成骨诱导组Runx2、Sp7、Ⅰ型胶原、OPN蛋白表达量明显高于对照组（P < 0.05）。成软骨诱导5、10、15 d，RT-qPCR检测成软骨诱导组软骨标志物SOX9、Ⅱ型胶原、蛋白多糖（Aggrecan）、透明质酸合成酶（Has2）mRNA相对表达量均显著高于诱导0 d时（P < 0.05）；诱导15 d，Western blot检测成软骨诱导组SOX9、Ⅱ型胶原、Aggrecan、Has2蛋白表达量明显高于对照组（P < 0.05）。通过miRNA芯片技术分别筛选出10个成骨和3个成软骨2倍变化幅度且平均标准化信号值> 2的差异miRNA。除miR-455-3p之外，其余差异miRNA验证结果与芯片结果比较有较好一致性。

　　结论：通过miRNA芯片技术对C3H10T1/2细胞系以及其诱导成骨和成软骨分化细胞进行检测对比，发现部分miRNA表达量在诱导后细胞中发生变化，为进一步挑选成骨和成软骨特异性miRNA进行功能验证和靶基因预测奠定了基础。