孙凯  年争好  徐成  李瑞欣  李晖

　　目的: 制备不同质量比的丝素蛋白复合胶原蛋白支架，分析其综合性能，优选软骨组织工程支架材料。

　　方法：按丝素蛋白∶胶原蛋白不同质量比，采用真空冷冻干燥法制备3种复合支架，分别为4∶2（A组）、4∶4（B组）和4∶8（C组）；检测每组复合支架的孔隙率、吸水膨胀率、力学性能及孔径。采用密度梯度离心法分离培养4 周龄雄性Wistar大鼠BMSCs，取第3代BMSCs接种于各组复合支架，培养1、3、5、7、9、11、13 d，MTT检测支架内细胞增殖情况；培养14 d采用HE染色和扫描电镜观察细胞在支架内部增殖、分布情况。

　　结果：A、B、C组支架孔隙率分别为94.6% ± 1.6%、80.6% ± 1.1%、60.6% ± 1.0%，A组显著高于B、C组，B组高于C组（P < 0.05）。吸水膨胀率分别为1 523.7% ± 186.6%、1 091.0% ± 151.6%、659.6% ± 161.4%，A组显著高于B、C组，但组间比较差异无统计学意义（F=6.67，P=0.08）；各组支架均具有较好的黏弹性，A、B、C组弹性模量分别为（23.1 ± 2.5）、（25.1 ± 2.3）、（29.8 ± 2.6） kPa，组间比较差异无统计学意义（F=2.00，P=0.28），符合关节软骨弹性模量值（4～35 kPa）；A、B、C组支架孔径分别为（103 ± 12）、（80 ± 15）、（60 ± 16）μm，3组间比较差异无统计学意义（F=2.22，P=0.26）。MTT检测示， 7、9、11、13 d时A组细胞增殖高于B、C组（P < 0.05）。培养14 d，扫描电镜观察示A组支架孔径大小较一致，相通性好，细胞在支架内部生长良好，伸展充分，基质分泌多；B、C组支架孔径较小，孔隙间相通性差，细胞在内部生长较差；HE染色和扫描电镜示支架内部A组细胞数量明显多于B、C组。

　　结论：以丝素蛋白∶胶原蛋白质量比为4∶2制备复合支架具有合适的孔隙率、吸水膨胀率、弹性模量和孔径，细胞在支架内部增殖更好，是软骨组织工程的理想支架材料。