李甲振  徐宗潮  张岩  卢新昌  石海龙  刘永奎

　　目的:通过观察肼苯哒嗪、5'-氮杂-2'-脱氧胞嘧啶核苷酸(5'-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)及其联合使用对人成骨肉瘤细胞MG-63的生长抑制作用,并检测对骨肉瘤细胞中WWOX基因表达的调控作用,初步明确肼苯哒嗪对骨肉瘤细胞的作用机制.

　　方法:取对数生长期的人骨肉瘤细胞株MG-63制成细胞悬液,计数板计数5×104个/ml,加入96孔板.分为肼苯哒嗪组(药物浓度为0.1、1.0、10 μmol/L)、5-Aza-CdR组(药物剂量为5、10、20 μmol/L)、肼苯哒嗪联合5-Aza-CdR组(药物剂量为0.1 μmo/L+5 μmo/L、1.0 lmol/L+10 μlmol/L、10 μmol/L+20 μmol/L)及对照组(培养基).噻唑蓝(MTT)比色法检测药物对MG-63细胞生长抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期分布作用及凋亡影响;Real-Time PCR技术检测WWOX mRNA表达改变情况;Western-blot检测药物处理后各组细胞中WWOX蛋白表达水平.

　　结果:肼苯哒嗪、5-Aza-CdR及其联合应用对MG-63细胞的增殖均有明显抑制作用,且呈浓度依赖性并与作用时间相关;联合应用较单用抑制作用明显增强,且各组差异有统计学意义.肼苯哒嗪、5-Aza-CdR可诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡,联合应用时诱导凋亡作用加强.肼苯哒嗪、5-Aza-CdR对骨肉瘤MG-63细胞中WWOX基因表达有促进作用,联合作用使WWOX表达明显增强.

　　结论:肼苯哒嗪可明显抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,并促进WWOX基因的表达,其作用机制可能为肼苯哒嗪能够使抑癌基因WWOX基因甲基化状态逆转,表达增加,从而抑制MG-63细胞的增殖.